非人靈長類動物（NHP）精（jīng）液樣本采集有多種目的，包括生殖研究、物種保護、傳染病（bìng）研究以及在藥物開發（fā）過程中評（píng）估生殖安全性。在生物（wù）醫藥研究中最常（cháng）見的精液采集方法是電刺激和陰莖振動刺（cì）激。電刺激是利用電流刺激NHP動物產生射精的過程。最常用的電刺激方法是直腸探針（zhēn）電刺激（jī）法（RPE）和陰莖電刺激法（fǎ）（PEP）。據（jù）報道，直腸探針（zhēn）電刺激產（chǎn）生的樣品精子濃（nóng）度低於陰莖電刺激。因此，它通常（cháng）被認為不太適合於精（jīng）液樣本的定量評價，而用於定性分析（xī）。陰莖電刺激最常用於收集精子（zǐ）進行定量分析，例如，測定精子數量和/或濃度，因為該方法采集到的精液量較大。而對（duì）於小型非（fēi）人靈長（zhǎng）類動物（如鬆（sōng）鼠猴和狨（róng）猴），陰莖振動刺激法（PVS）是比電刺（cì）激法更優的采精方法，因為它（tā）更適合這些動物的生理特點，同時對動物的（de）福利影響較小。

直腸探針電刺激法（RPE）

描述：這（zhè）是較早使用的NHP采精方法。通過直接刺激盆腔器官周圍的神經肌肉，導致盆（pén）腔器官收縮和放鬆，從而排出內容物。該過程需要對動物（wù）進（jìn）行輕度麻醉，但不（bú）需要對動物進行訓練。操作者的技（jì）術和培（péi）訓對（duì）程序的成功至（zhì）關重要。

操作步驟：動物被輕度麻醉後側臥或在保定架上俯臥，使（shǐ）用合適大小的探針，在插入探（tàn）針前，電極需輕磨、衝洗和消毒。陰莖被輕輕拉出並清潔（可用無菌生理鹽水），然後在探針上塗上一層薄薄的水溶性潤滑凝膠。探針電極需對準（zhǔn）前列腺，為了確保電極與前列腺接觸，可（kě）將探頭的另一端（duān）抬起，輕輕向下按壓（yā）探頭的尖端。通過逐漸增加電壓直到動物出現（xiàn）腿（tuǐ）部伸展（zhǎn）等反應，確定動物的電壓設定點。達到反應點後（hòu），電壓保持不變一段時（shí）間（最多約5秒），然後逐（zhú）漸降（jiàng）低。這種電壓的逐（zhú）步增（zēng）加、保持和降低構成了一個（gè）完（wán）整的刺激周（zhōu）期。通過多次刺激，通常三組刺激可以產生射（shè）精。在整個刺激過程中，陰（yīn）莖的尖端需要保持（chí）在（zài）預熱（rè）的玻璃燒杯或其（qí）他收集容器（qì）上方。

適用（yòng）場景：由（yóu）於這個方法產生的樣本精子濃度（dù）較低，因此更適合用（yòng）於定性（xìng）分析，如檢測精液中精子的存在以確認性成熟，以及評估精子細胞的形態。

陰莖電刺激法（PEP）

描述：該方法通（tōng）過刺激陰莖中的傳（chuán）入神經末梢，隨後將刺激傳遞到（dào）與陰莖勃（bó）起和射精（jīng）相關的傳出神（shén）經通路。該方法在動物清醒狀態下采集，傳統（tǒng）的保定方式是使用猴杆或者（zhě）頸圈將動物固定（dìng）在開放式的猴椅上，但近（jìn）期有研究表明使用封閉箱椅（closed box chair）是一種更優（yōu）化的保定方式，可以訓練動物直（zhí）接從籠子進入封（fēng）閉箱椅內，對動物福利、精液質量都有顯著改善。PEP已被證明能夠更好（hǎo）地刺激整個生殖道，並且由於無需麻醉，減（jiǎn）少了尿液汙染和精（jīng）液樣本稀釋（shì）的問題。此外，與直腸探針法相關的逆行射精（精液進入膀胱）的（de）風險在（zài）陰（yīn）莖電刺激法中被（bèi）最小化。這種非侵入（rù）性技術確實需要對動物進行（háng）訓練，並且需要控製實驗環境（例如安靜的房間、熟悉動物的（de）工（gōng）作（zuò）人員）。與直腸探針電刺激技（jì）術相比，這種方法可（kě）能需要更（gèng）長的時間來獲取樣本，但通常不會超過幾（jǐ）分鍾（zhōng）。陰莖電刺激（jī）法的一（yī）個（gè）潛在缺點是，有些（xiē）動物（wù）對陰莖刺激沒有反應，因（yīn）此無法提供精液樣本（běn）。

操作步驟：將陰（yīn）莖輕輕（qīng）拉（lā）出，用潤（rùn）滑凝膠包裹的除顫器墊包裹陰莖，將電極連接到電刺（cì）激器設備上。從低電壓開始刺激（根據動物的品種和（hé）體格）不超（chāo）過15秒，逐漸增加到預設的最（zuì）大（dà）值。每次刺（cì）激時，觀察動（dòng）物的生理反應和射精，整個過程通常不超過3次（cì）刺（cì）激。不同品（pǐn）種的（de）電壓刺激相差（chà）較（jiào）大，對於食蟹猴而（ér）言，可以從10-30伏特開（kāi）始（shǐ），如果需要，可以以 5-10 伏（fú）特的增量逐步增加，最高至約50 伏特。在刺（cì）激過程中將收集管放在陰莖尖端以收集射精的精液樣本。

適用場景：該方法適（shì）用於需要較高（gāo）精子數量和質量的場景，如體（tǐ）外受精（IVF）或（huò）單精子卵胞漿內注射（ICSI），因（yīn）為其能（néng）獲得更高的精液量和精子濃度。

陰莖（jīng）振動刺激法（PVS）

描述：該方法利用自然反射，產生正常的射精反應，從而獲得自然射精。使用經（jīng）過改裝的振動設備，並配備收集容器。該方（fāng）法通常將清醒（xǐng）的動物保（bǎo）定在猴椅上（shàng），並在黑暗的房間中進行，避免動物過於激動。

操作步驟：將陰莖輕輕從包皮鞘中拉出，將振動玻璃管放在陰莖尖端並（bìng）保持接（jiē）觸。根據動物對刺激的反應（yīng）逐漸調整振動參數，並在刺激期間提（tí）供休息時間。如果在15-20分鍾內未達到射精，則停（tíng）止（zhǐ）刺激。

適（shì）用場景：在小（xiǎo）型非人靈長類動物（如鬆鼠猴（hóu）和狨猴）中，PVS是首選方法，因為（wéi）這些動物體型較小，直接放置電極進行陰莖刺激較（jiào）為困難（nán），且直腸探針法在這些小（xiǎo）型NHP物種中也不太適用，較小的生殖（zhí）道和消化（huà）道結（jié）構可能無（wú）法讓直腸（cháng）探（tàn）針精準（zhǔn）放（fàng）置。

同時，對鬆鼠猴和狨猴的研究發現，與 RPE 采集的樣本（běn）相（xiàng）比，振動刺激采集的精液樣本中精（jīng）子和附屬腺的產生（shēng）顯著增加。PVS 可產（chǎn）生質量更高（gāo）的射精，結合了不需要鎮靜或輕度麻醉的優點，幾乎不引起不（bú）適，並產生無汙染的自然射精。

無論采用何種精液（yè）采集方法，均應慎重考慮采精動物的選擇（zé）。確認精（jīng）子發生（通過檢測精液中的精子（zǐ））是確認 NHP 性成熟的最可靠方法。在一些 NHP 種屬中，精液采集時間應考慮季節性。在此類確認（rèn）之前，可通過應用常規選擇標準（如年齡、體重和/或睾丸體積）優（yōu）化動物的選擇（zé）。睾酮由於（yú）其脈衝式（shì）/晝（zhòu）夜節律性波動和動物間個體差異較大，並不（bú）是可靠判（pàn）定性成（chéng）熟的指標。

性成熟的具體標準還取決於動物的種屬甚至地理來源（yuán）。例如，來（lái）自毛裏求斯的食蟹猴已被證實從 3-4 歲開始性成（chéng）熟（精液中的精子），而來自亞洲大陸的食蟹猴需要額（é）外一年（> 4 歲）才能達到性（xìng）成熟。關於食蟹猴和恒河猴的文獻表明，小於4歲和體重小於4kg的動物不太可能性成熟。

精液采集操作的福利考（kǎo）量

在精液采集時，也應關（guān）注動物福利的問題，比如直腸探針電刺激法（RPE）比其他采精技術更具侵入性，因為該方法需要將探針插入動物的直（zhí）腸，直接刺激前列（liè）腺和盆腔器官，可能會對動物造成一定的不適或（huò）潛（qián）在的生理（lǐ）損傷（shāng）。因此在進行直腸（cháng）探針（zhēn）電刺激（jī）前，應仔細檢查直腸是否存（cún）在異常，如瘢（bān）痕、狹窄或痔（zhì）瘡。操（cāo）作者需要密切監控動物的反應和身體狀況，定期檢查是否有出血或組織損傷的跡象（xiàng）。一旦發現異常，應立即停止操作並給予動物恢複的時間。同時，提供必要的操作後護理和采精頻（pín）率的限製也是確（què）保動物（wù）福利的重要措施。

而陰莖電刺激和陰莖震動刺激法雖然無創，動物也是無需麻醉在猴椅或者封閉箱（xiāng）椅中操作，因此操作過程中應（yīng）關注的是對動物進行馴化和保（bǎo）定適應，減（jiǎn）少動物的（de）應激。同（tóng）時在電刺激時應嚴（yán）格控製給予刺激的（de）電流，以（yǐ）及電刺激的次數。

通過上文描述，可以看出（chū）選擇合適的動物（wù）以及合適的方法才能（néng）夠采集到合適的樣本（běn），同（tóng）時應關注動物的福利問題，最大程度減少對動物的不（bú）利影響。